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TECHNICAL ARTICLES
更新時(shí)間：2024-05-29
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美國(guó)AAT Bioquest公司
前身是ABD Bioquest，Inc. 簡(jiǎn)稱AATbio，是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家提供研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。
AAT Bioquest產(chǎn)品系列
1、用于標(biāo)記小藥物分子和生物聚合物（如蛋白質(zhì)，核酸和碳水化合物）的反應(yīng)熒光和發(fā)光探針，生物素和標(biāo)簽酶
2、用于檢測(cè)蛋白質(zhì)，核酸和活細(xì)胞的熒光和發(fā)光探針
3、用于檢測(cè)多種酶的熒光和發(fā)光探針，特別是水解和氧化還原酶
4、開發(fā)用于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的試劑
5、生理和神經(jīng)學(xué)探針，如鈣指示劑和膜電位探針
AAT Bioquest產(chǎn)品列表
抗體 | 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抗體等 |
生化檢測(cè) | 酶檢測(cè) |
核酸檢測(cè) | |
蛋白生化 | |
小分子檢測(cè) | |
結(jié)構(gòu)單元 | 交聯(lián)劑 |
Oligo合成 | |
多肽合成 | |
反應(yīng)性探針 | |
細(xì)胞檢測(cè) | 細(xì)胞生物學(xué) |
免疫學(xué) | |
微生物學(xué) | |
神經(jīng)生物學(xué) | |
HTS檢測(cè) | 細(xì)胞分析 |
GPCR | |
離子通道 | |
標(biāo)記探針 | 生物素及衍生物 |
傳統(tǒng)標(biāo)記用染料 如Cyanines、Rhodamines等 | |
新型標(biāo)記用染料 如iFluor、mFluor系列染料和試劑盒 |
關(guān)于熒光染料：
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其最佳濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞染色。
熒光顏色
DiI（橙色 ） DiO（綠色）
DiD（紅色 ） DiR（深紅）
這些顏色為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用，其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)，為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常優(yōu)質(zhì)的替代品。
DiR在活體成像或者示蹤中非常有用，因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。
使用方法：
1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備
(1) 配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：
儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
注意：未使用的儲(chǔ)存液保存在-20℃，避免反復(fù)凍融
(2) 工作液制備：
用合適的緩沖液(如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)
稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 µM的工作液。
注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來(lái)配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件。
2. 懸浮細(xì)胞染色
(1) 懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。
(2) 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，
不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
(3) 1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
(4) 傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37的培養(yǎng)液。
(5) 重復(fù)(3)，(4)步驟兩次以上。
3. 粘壁細(xì)胞的染色
(1)使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。
(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
(4)在37 培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
(5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。
4. 流式細(xì)胞儀的檢測(cè)
DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
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